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液相色譜柱的運用

時間:2021-08-23 點擊次數:270
  在使用色譜柱之前,好對色譜柱的功能進行測試,并將測試結果保存下來,作為今后評估色譜柱功能變化的參考。柱函數測試應根據色譜柱工廠報告中的條件(工廠試驗中使用的條件為佳條件)進行,只要測量結果具有可比性。然而,應該注意的是,柱的功能可能會因樣品、活性相、柱溫度和其他使用條件的不同而有所不同。
 
  1、樣品的前處理
 
  好運用活動相溶解樣品。
 
  預處理柱用于去除樣品中的強極性或柱填料的不可逆吸附。
 
  采用0.45μm濾膜去除顆粒雜質。
 
  2、活動相的制造
 
  液相色譜是指樣品組分在柱填料和活性相之間進行質量交換以達到分離的目的,因此活性相必須具有以下特性:
 
  答:活性樣品相對于樣品具有一定的溶解性,這可以確保樣品成分不會被存放在柱中(或在柱中保存很長時間)。
 
  活性相和樣品不發生化學反應。
 
  為了獲得良好的分離效果,活性相的粘度應盡可能??;降低塔的壓降,延長泵的使用壽命(可采用遞升溫法降低活性相的粘度)。
 
  活性相的物理化學性質應與所使用的檢測器相適應。優選地使用低紫外吸收的溶劑來使用紫外檢測器。
 
  即活化相的沸點不能太低,否則容易產生氣泡,不能進行試驗。
 
  在生產活動階段后,必須對其進行脫氣處理。去除活性相中溶解的微量氣體不僅有利于檢測,而且可以防止微量氧對樣品的活性相的影響。
 
  3。運動相速度的選擇是柱內運動相線速度的函數,采用不同的流速可以得到不同的柱效應。對于特定的液相柱,為了找到的柱效,好采用佳的流速。對于內徑為4.6mm的液相色譜柱,流速為1ml/min,內徑為4.0mm時,流速為0.8mL/min。   當選用流速時,剖析時刻或許延伸。改變流動相洗滌強度的方法可以縮短分析時間(例如,在使用反相柱時,可以適當增加甲醇或乙腈的含量)。
 
  試驗前,活性水相的制備效果好,特別是在夏季使用緩沖溶液作為活性相時。
 
  流動相要求使用0.45μm的濾膜來去除顆粒雜質。
 
  運用HPLC級溶劑制造活動相,運用適宜的活動相可延伸液相色譜柱的運用壽數,進步柱功能。

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