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IEC緩沖液的類型

時間:2022-03-09 點擊次數:40

在離子交換過程中保持pH的恒定是十分重要的,正如前面討論過的,pH的改變會造成蛋白質帶電荷數量和分布狀況發生變化,從而直接影響到蛋白質是否能結合在交換劑上以及結合力的強弱。因此,在離子交換色譜中流動相必須使用緩沖液。

緩沖液的種類很多,能夠起緩沖作用的物質可分為兩類:第一類是由弱酸(或弱堿)及相應的鹽構成的系統;第二類是兼性離子化合物。對于第一類緩沖物質,在進行離子交換時,如果緩沖離子所帶的電荷與離子交換劑上的功能基團相反,將參與離子交換過程,并可能對局部pH產生影響,因此應盡可能采用與功能基團帶同種電荷的緩沖離子,即:使用陰離子交換劑時選擇帶正電荷的緩沖離子;使用陽離子交換劑時選擇帶負電荷的緩沖離子。

當然這也并不是絕對的,比如磷酸鹽緩沖液也經常在陰離子交換過程中被采用,但在這種情況下應特別注意在上樣前充分平衡,確保色譜系統的pH和離子強度與起始緩沖液一致。第二類緩沖物質在陰、陽離子交換中均能采用。表1和表2分別列出了陽離子交換色譜和陰離子交換色譜時常用的緩沖液。

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在離子交換過程中雖然可以除去很多雜蛋白,起到純化效果,但目的蛋白的洗脫峰中必然含有大量緩沖物質和鹽的成分,這些成分的引入對于目的蛋白來說本身也是一種雜質。特別在色譜后需對洗脫峰進行冷凍干燥,以得到純蛋白樣品時,在凍干后的粉末中往往絕大部分是緩沖物質和鹽。如果在凍干前進行脫鹽或透析操作,雖然可以基本除去這些雜質,但也有可能造成蛋白活性的回收率下降。此時應優先考慮采用揮發性的緩沖物質,這樣在凍干階段可以將這部分雜質除去,常見的揮發性緩沖物質列于表3。

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